ELISA mit schlechtem Ergebnis?Folgen Sie uns, um die richtige Elisa-Platte auszuwählen.
Die Auswahl einer geeigneten ELISA-Platte ist der erste Schritt zu einem erfolgreichen ELISA-Experiment, aber viele Menschen ignorieren dies. Wenn Menschen Experimente durchführen, betrachten sie oft nur das Experiment selbst, wissen aber nicht, dass das Produkt oft einen großen Einfluss auf das Experiment hat. Die richtige Auswahl der Produkte trägt zum Erfolg des Experiments bei. Bei der Durchführung von ELISA-Experimenten berücksichtigen wir normalerweise die folgenden Faktoren:
1. Die Form des Bodens
Gegenwärtig entwerfen die Hersteller die enzymmarkierten Wells als unabhängige Säulen und erhöhen den Abstand zwischen den Wells entsprechend, so dass sie unabhängig voneinander getrennt werden können, wodurch die Kreuzkontamination minimiert wird. Verschiedene Arten von Elisa-Platten haben unterschiedliche Formen des Vertiefungsbodens. Hier sind einige gängige Lochbodenformen:
Flacher Boden: Der Boden ist horizontal, auch F-Boden genannt. Das Licht wird nicht durch den Boden abgelenkt, der das Licht am stärksten durchlassen kann. Verwenden Sie es für Experimente, die aus Gründen der Sichtbarkeit oder aus anderen Gründen einen runden Boden erfordern.
Runder Boden: Auch bekannt als U-Boden, bietet die besten Reinigungsergebnisse und Hybridleistung, geeignet für Anwendungen, die Sedimente testen müssen.
C-Boden: Es kann eine gute Reinigungswirkung zwischen dem flachen Boden und dem runden Boden erzielen und gleichzeitig die Vorteile des flachen Bodens kombinieren.
Kegelboden: Auch als V-Boden bekannt, eignet er sich für die präzise Probenahme und Lagerung von Mikroproben zur optimalen Gewinnung kleiner Volumina.
2. Die Farbe der Elisa-Platte
Es gibt drei Farben der Elisa-Platte: transparent, schwarz und weiß.
Die Mehrheit der ELISA wählt transparente Platten als Versuchsmaterial. Für die Lumineszenzdetektion werden im Allgemeinen weiße und schwarze Elisa-Platten verwendet. Die schwarze ELISA-Platte selbst absorbiert Licht, daher ist ihr Signal schwächer als das der weißen ELISA-Platte. Schwarze Elisa-Platten werden im Allgemeinen verwendet, um stärkeres Licht zu detektieren, wie z. B. Fluoreszenzdetektion; Im Gegensatz dazu können weiße Elisa-Platten für die Detektion bei schwächerem Licht verwendet werden und werden häufig für die allgemeine Chemilumineszenz- und Substratfarbentwicklung (z. B. duale Luciferase) verwendet. Reportergenanalyse).
3. Das Material der Elisa-Platte
Gängige Materialien sind Polyethylen (PE), Polypropylen (PP), Polystyrol (PS), Polyvinylchlorid (PVC) und Polycarbonat (PC).
Die am häufigsten verwendeten Materialien in ELSIA sind Polystyrol und Polyvinylchlorid. Polyvinylchlorid-Weichpappe ist dünn, kann geschnitten werden und der Preis ist niedrig. Der Nachteil ist, dass das Finish nicht so gut ist wie bei der Styroporplatte und der Boden des Lochs nicht so flach wie Styropor ist. Aber auch der entsprechende Hintergrundwert wird steigen. Üblicherweise wird eine Ionenpfropfungsbehandlung auf der Oberfläche der ELISA-Platte durchgeführt und aktive funktionelle Gruppen wie Aldehydgruppen, Aminogruppen und Epoxygruppen werden in die Polymeroberfläche eingeführt, um die Leistung der Substratoberfläche zu verbessern.
4. verschiedene Bindungsmechanismen
Die effiziente Bindung des Beschichtungsmaterials an die Unterseite der Platte ist ein entscheidender Schritt im ELISA. Daher sollten die strukturellen Eigenschaften und chemischen Eigenschaften der zu beschichtenden Substanz vor dem Experiment sorgfältig analysiert werden, um eine geeignete Elisa-Platte auszuwählen. Generell gibt es mehrere Möglichkeiten, das Beschichtungsmaterial an den Plattenboden zu binden: passive Adsorption, kovalente Bindung und Affinity Capture.
Passive Adsorption: Der Mechanismus der passiven Adsorption ist komplex, und die Bindung zwischen dem Beschichtungsmaterial und dem Boden der Platte beruht hauptsächlich auf zwischenmolekularen Kräften (Van-der-Waals-Kraft) und Wasserstoffbrückenbindungen. Bei den meisten ELISAs erfolgt die Bindung der Beschichtungssubstanz an den Plattenboden durch passive Adsorption. Im Allgemeinen erfolgt die Bindung zwischen Antigenen (oder Antikörpern) mit mittlerem und großem Molekulargewicht und dem Boden der Platte durch passive Adsorption. Bei der Auswahl einer Elisa-Platte werden häufig die hydrophoben/hydrophilen Eigenschaften der Plattenunterseite berücksichtigt. Die folgende Tabelle listet den Anwendungsbereich und die Verwendung verschiedener hydrophiler Substratoberflächen auf:
hydrophil | Prioritätsbindung | Die Hauptverwendung |
- | Moleküle, die signifikante hydrophobe Regionen enthalten, wie z. B.: Lipide, Lipoproteine, große Proteine | Antigen-ELISA, FlA, LIA |
Plus | Biomoleküle mit hydrophilen/hydrophoben Eigenschaften wie: mittlere bis große Proteine, Immunglobuline, Albumin | Doppelter Antikörper-Sandwich-ELISA, Antigen-ELISA |
plus plus | Biomoleküle mit hydrophilen/hydrophoben Eigenschaften wie: kleine bis große Proteine, Immunglobuline, Albumin, LPS, phosphorylierte Proteine, Glykoproteine | Doppel-Antikörper-ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glykoproteine, polare Lipidmoleküle, Phospholipide, Cardiolipide | Antigen-ELISA |
Affinity Capture: Affinity Capture basiert auf der spezifischen Bindung von markierten Makromolekülen an ihre entsprechenden Rezeptoren. Markierte Makromoleküle können entweder durch chemische Kopplung oder durch Gentechnik erhalten werden.
Merkmale von Affinity Capture sind:
1. Hohe Spezifität
2. Kann das Signal-Rausch-Verhältnis der Messergebnisse verbessern
Die üblicheren Vertiefungsbodenoberflächen sind: mit Streptavidin (Streptavidin) beschichtete Oberfläche; mit Nickelchelat (Nickelchelat) beschichtete Oberfläche und mit Glutathion (Glutathion, GSH) beschichtete Oberfläche.
3. Streptavidin-Oberfläche: Die hohe Affinität und Spezifität von Streptavidin und Biotin werden genutzt, um die Bindung der Bodenplatte an das beschichtete Protein zu realisieren.
4. Nickelchelatoberfläche: Nickelchelat wird an die Polymeroberfläche gebunden, um Fusionsproteine mit His (Histidin)-Tags zu binden.
5. Glutathion-Oberfläche: Nutzung der Enzym- und Substratspezifität zwischen Glutathion und Glutathion-Sulfhydryltransferase (GST), um eine Bindung der Bodenplatte an das Hüllprotein zu erreichen.
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