Wie wählt man die richtigen PCR-Röhrchen aus?
Antwort: BKMAM-PCR-Röhrchen eignen sich für Mainstream-PCR-Instrumente und Echtzeit-PCR-Instrumente auf dem Markt (PCR-Instrumente von BD, Beckman und Wanshi).
Vergleich von quantitativer Echtzeit-PCR, digitaler PCR und herkömmlicher PCR:
Überblick über die digitale PCR: Messen Sie den Anteil negativer Replikate, um die absolute Kopienzahl zu bestimmen.
Überblick über die Echtzeit-PCR: Die Messungen werden während der PCR-Amplifikation durchgeführt.
Überblick über die traditionelle PCR: Messen Sie die Menge des angesammelten PCR-Produkts am Ende des PCR-Zyklus.
Ist die digitale PCR quantitativ?
A: Ja, der Anteil negativer RCR-Antworten entspricht dem statistischen Poisson-Algorithmus.
Ist die Echtzeit-PCR quantitativ?
A: Ja, da die Daten während der exponentiellen (logarithmischen) Phase der PCR gesammelt werden, während der die Menge des PCR-Produkts proportional zur Menge der Nukleinsäurematrize ist.
Ist herkömmliche PCR quantitativ?
A: Nein, aber der Vergleich der Intensität der verstärkten Bande auf dem Gel mit einem Standard bekannter Konzentration kann Ihnen ein „halbquantitatives“ Ergebnis liefern.
Anwendungen der digitalen PCR: absolute Quantifizierung der Viruslast, absolute Quantifizierung von Nukleinsäurestandards, absolute Quantifizierung von Next-Generation-Sequencing-Bibliotheken, Nachweis seltener Allele, absolute Quantifizierung der Genexpression, Mischungsanreicherung und -trennung
Anwendungen der Echtzeit-PCR: Quantifizierung der Genexpression, Microarray-Validierung, Qualitätskontrolle und Assay-Validierung, Pathogennachweis
, SNP-Genotypisierung, Kopienzahlvariation, microRNA-Analyse, Virusquantifizierung, siRNA/RNAi-Experimente
Anwendungen der traditionellen PCR: DNA-Amplifikation, Sequenzierung, Genotypisierung, molekulares Klonen
Fazit: Vorteile der digitalen PCR: Keine Abhängigkeit von Referenzen oder Standards, gewünschte Präzision kann durch Erhöhung der Gesamtzahl der PCR-Replikate erreicht werden, hohe Toleranz gegenüber Inhibitoren, Fähigkeit zur Analyse komplexer Gemische
Im Gegensatz zur herkömmlichen qPCR reagiert die digitale PCR linear auf die Anzahl der entstehenden Kopien, und kleine Unterschiede im Fold-Change können erkannt werden.
Vorteile der Echtzeit-PCR: erhöhter dynamischer Detektionsbereich, keine Post-PCR-Verarbeitung erforderlich, Detektion in der Lage, Veränderungen bis zum 2--fachen abzudecken, Datenerfassung während der exponentiellen Phase der PCR, Anstieg des Reporter-Fluoreszenzsignals mit die resultierenden Amplikons Proportional in der Anzahl liefern Spaltsonden eine dauerhafte Aufzeichnung der Spaltung der Amplikons
Nachteile der traditionellen PCR: schlechte Genauigkeit, geringe Sensitivität, kleiner Dynamikbereich < 2 Logs, geringe Auflösung, keine Automatisierung, nur differenzielle Analyse nach Vorgaben, Ergebnisse nicht als Zahlen dargestellt, unzureichende Quantifizierung mittels Ethidiumbromid-Färbung, Post-PCR
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Michael Peng
Changde BKMAM Biotechnologie Co., Ltd
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