Freunde, die zellbezogene Experimente durchführen, müssen häufig Methoden zum Einfrieren von Zellen anwenden. Kurz gesagt besteht die Aufgabe der gefrorenen Lagerung darin, Zellen in einer Umgebung mit niedrigen Temperaturen aufzubewahren, um den Zweck der Langzeitkonservierung zu erreichen. Zellen weisen während des Übertragungsprozesses einen gewissen Grad an Mutation auf. Um sicherzustellen, dass die Zellen im Falle einer Zellverschmutzung und -mutation weiterhin verwendet werden können, werden einige Zellen üblicherweise zum Einfrieren verwendet.
Das Prinzip der gefrorenen Zelle
Ein Prinzip beim Einfrieren und Wiederherstellen von Zellen ist die „langsame gefrorene Fusion“, um die Vitalität der Zellen maximal zu erhalten. Vereinfacht gesagt muss es beim Einfrieren und Abkühlen langsam sein, und beim Erholen von niedrigen Temperaturen muss es schnell erhitzt werden. Der Grund für das langsame Einfrieren liegt darin, dass die Zellen große Eiskristalle bilden, wenn sie direkt einer Umgebung mit extrem niedrigen Temperaturen wie flüssigem Stickstoff ausgesetzt werden, die die Zellen schädigt.
Wenn Sie es langsam einfrieren, können die Zellen langsam dehydriert werden, um den Zweck des Zellschutzes zu erreichen. Darüber hinaus soll bei der Wiederherstellung auch verhindert werden, dass aus kleinen Eiskristallen große Eiskristalle, also die schweren Kristalle von Eiskristallen, entstehen. Wenn also normalerweise jeder Zellen einfriert, kommt es immer zu Zellverlusten, was sich wahrscheinlich auf den Schritt des Einfrierens auswirken wird.
Verschiedene Methoden zum Einfrieren von Zellen
Manuelle Methode: Gefrorene Zellen werden normalerweise in flüssigem Stickstoff gelagert. Die manuelle Betriebsmethode besteht darin, den Gradienten im Kühlschrank zu kühlen. Bewahren Sie die Zellen im gefrorenen Aufbewahrungsröhrchen auf und stellen Sie sie in einer Kühlschrankumgebung bei 4 Grad C, -20 Grad C, -80 Grad C der Reihe nach auf. 24 Stunden lang bei -80 Grad C eingefroren, bevor es in flüssigen Stickstoff überführt wird. Für die manuelle Kühlung sind keine zusätzlichen Ergänzungen anderer Verbrauchsmaterialien erforderlich. Es kann manuell bedient werden. Es ist das einfachste, aber es ist nicht einfach. Der eigentliche Vorgang ist mühsam. Und der Effekt ist nicht sehr gut, da diese Kühlmethode immer noch nicht gleichmäßig ist und nicht unbedingt für empfindlichere Zellen anwendbar ist.
Gradientenkühlbox: Die auf dem Markt erhältliche Gradientenkühlbox wird speziell für die gleichmäßige Kühlung des Gefrierprozesses verwendet. Die Abkühlgeschwindigkeit beträgt normalerweise -1 Grad/Minute. Legen Sie das gefrorene Lagerrohr in die Gradientenkühlbox und stellen Sie die Gradientenkühlbox direkt in die Kühlschrankumgebung von -80 Grad C, um die Nacht ohne manuellen Gradientenbetrieb zu verbringen. Senken Sie dann das Ablagerohr ab und legen Sie es in flüssigen Stickstoff. Der Effekt der Verwendung von Gradientenkühlboxen ist besser, da handelsübliche Kühlboxen auf dem Markt eine annähernd gleichmäßige Kühlrate gewährleisten können.
Es gibt zwei gängige Gradientenkühlboxen auf dem Markt. Es muss Isopropyl hinzugefügt werden, normalerweise ein PC-Kastengehäuse. Wenn Sie es verwenden, fügen Sie bei der Verwendung Isopenol zur Skalierungslinie in der Box hinzu. Das Isopropanol dient als Trägerstoff zur Wärmespeicherung und -verteilung.
Eine andere Art muss nicht mit Isopropyl und Schäumen versetzt werden, und der Gefrierschrank kann direkt während des Gebrauchs aufgestellt werden, was bequemer zu bedienen ist.
Es wird empfohlen, die Kühlbox aus Isopropanol nach mehrmaligem Gebrauch auszutauschen. Da Isopropanol jedoch eine schädliche Flüssigkeit ist, die den Experimenten und der Umwelt schadet, kann sie in der Regel mehrmals verwendet werden. Es ist jedoch darauf zu achten, dass die Flüssigkeit in einer bestimmten Menge vorhanden ist.
Nicht programmierte Tiefkühllagerung: Verwenden Sie nicht programmierte Tiefkühlflüssigkeiten, die auf dem Markt erhältlich sind. Im Vergleich zur herkömmlichen gefrorenen Flüssigkeit kann die interne Komponente die Schäden an den Zellen des Eiskristalls verringern, sodass weder der Gradient zum Abkühlen noch die Gradientenkühlbox erforderlich ist. Die Tiefkühllagerung kann direkt in einer Kühlschrankumgebung mit -80 Grad C erfolgen.
Viele Zellproben sind sehr wertvoll. Zusätzlich zu uns müssen wir es bei Experimenten verwenden. Sie müssen auch bei der entsprechenden Produktauswahl möglichst gute Produkte auswählen. Wählen Sie ein gefrorenes Lagerröhrchen mit qualifizierter Qualität aus, versuchen Sie, das Gradientenkühlwerkzeug zum Einfrieren zu verwenden, und maximieren Sie die Garantie einer geringen Zellschädigung, um kleine Verluste aufgrund geringfügiger Schäden zu vermeiden.